1. Опис і використання прокальцитоніну Прокальцитонін (ПКТ) являє собою невеликий білок, що складається...
2. Моноклональні антитіла до ПРОКАЛЬЦИТОНІН компанії Біалекса

Опис і використання прокальцитоніну

Прокальцитонін (ПКТ) являє собою невеликий білок, що складається з 116 амінокислотних залишків і має молекулярну масу близько 13 кДа. Амінокислотна послідовність ПКТ була вперше описана дослідниками Муллек і співавторами в 1984 році. ПКТ належить до сімейства родинних білків, в яке входять пов'язані з геном кальцитоніну пептиди I і II, Амілін, адреномодулін і кальцитонін. Як і інші пептиди зазначеного сімейства, ПКТ виділяється з молекули-попередника - пре-прокальцитоніну, що складається з 141 амінокислотних залишків, шляхом видалення 25 амінокислотних залишків з N-кінця молекули.

У 1993 році було зафіксовано підвищений вміст ПКТ у пацієнтів, які страждають системними інфекціями бактеріального походження, в зв'язку з чим в даний час ПКТ розглядається в якості основного маркера порушень, що супроводжуються системним запаленням і сепсисом. Діагностична цінність ПКТ полягає в наявності тісного взаємозв'язку між концентрацією ПКТ і вагою запалення. Було встановлено, що «запальний» ПКТ не виробляється в C-клітинах. Імовірно джерелом ПКТ при запаленні є клітини нейроендокрінного походження.

У деяких випадках підвищення концентрації ПКТ може бути викликано факторами, не пов'язаними з утворенням сепсису і інфекції. Хірургічне втручання, політравми, тепловий шок, опіки і кардіогенний шок також можуть привести до збільшення рівня вмісту ПКТ. Механізм підвищення концентрації ПКТ в зазначених випадках на сьогоднішній день чітко не встановлено. Численні проведені дослідження вказують на важливість моніторингу змін концентрації ПКТ після кардіохірургічного втручання або трансплантації серця в цілях визначення випадків гострого відторгнення трансплантата під впливом бактеріальних або грибкових інфекцій.

Таким чином, ПКТ має високу діагностичну цінність, а доцільність визначення його концентрації в крові пацієнтів з використанням специфічних моноклональних антитіл є досить перспективною і абсолютно очевидною.

Будова прокальцитоніну, кальцитоніну і катакальціна

Як правило, ПКТ виробляється в С-клітинах щитовидної залози. В результаті декількох послідовних розщеплення утворюються три молекули: N-кінцевий фрагмент (N-кінцевий ПКТ, 57 амінокислотних залишків), кальцитонін (32 амінокислотних залишку) і катакальцін (21 амінокислотний залишок) (рис. 1).

Мал. 1. Амінокислотна послідовність прокальцитоніну. 1 - сигнальний пептид (25 а.к.о.); 2 - N-кінцевий фрагмент (N-термінальний ПКТ, 57 а.к.о.); 3 - кальцитонін (32 а.к.о.); 4 - катакальцін (21 а.к.о.).

N-кінцевий фрагмент прокальцитоніну (PCT) являє собою пептид, що містить 57 амінокислотних залишків. Моноклональні антитіла, специфічні до N-кінцевого фрагменту ПКТ, рекомендуються до застосування для імунологічного виявлення ПКТ в поєднанні з антитілами, специфічними до кальцитоніну або катакальціну. Специфічні до N-кінцевого фрагменту ПКТ антитіла можуть з високою ефективністю застосовуватися в якості захоплюючих антитіл при проведенні досліджень сендвіч-методом.

Кальцитонін - продукт ферментативного розщеплення прокальцитоніну, являє собою пептид, що складається з 32 амінокислотних залишків, молекулярна маса якого становить близько 3,4 кДа, теоретична pI 6,72. Кальцитонін є гормоном, які беруть участь у метаболізмі кальцію і фосфору.

Катакальцін є С-кінцеву частину молекули прокальцитоніну, що складається з 21 амінокислотного залишку, молекулярна маса якої становить близько 2,4 кДа, теоретична pI5,26.Фізіологіческая роль катакальціна невідома.

Моноклональні антитіла до ПРОКАЛЬЦИТОНІН компанії Біалекса

Компанія Біалекса пропонує моноклональні антитіла, що володіють високою специфічністю до різних епітопів молекули кальцитонина: до N-кінцевого фрагменту ПКТ, кальцитоніну і катакальціну. Пари моноклональних антитіл, специфічних до різних частин молекули ПКТ, можуть використовуватися для виявлення необроблених або частково оброблених молекул ПКТ. Специфічність антитіл показана на рис. 2.

Мал. 2. епітопной специфічність моноклональних антитіл компанії Біалекса до ПРОКАЛЬЦИТОНІН.

Найбільш високі показники чутливості при проведенні імунологічних досліджень для виявлення ПКТ в зразках крові пацієнта були досягнуті з використанням наступної пари моноклональних антитіл компанії Біалекса: CB5 (кальцитонін-специфічне, підкладка) і 4PC2 (N-кінцевий ПКТ, детекторне антитіло). Проте, з метою виявлення ПКТ під час проведення імунологічних досліджень сендвіч-методом також можуть використовуватися деякі інші комбінації моноклональних антитіл (рис.3).

Мал. 3. Пари антитіл, рекомендовані для визначення прокальцитоніну в сендвіч ІФА

Антитіла пройшли випробування, спрямовані на визначення їх здатності до виявлення ПКТ за допомогою методу Вестерн-блот. Все моноклональні антитіла здатні виявляти ПКТ під час проведення блоттинга після ДСН-електрофорезу в відновлюють умовах.

Антитіла до катакальціну можуть використовуватися для специфічного і сенситивного виявлення ПКТ в крові людини. Використання антитіл до катакальціну рекомендується головним чином як захоплюючих антитіл при проведенні ПКТ імунологічних досліджень.

Моноклональні антитіла до кальцитоніну

Рекомбінантний прокальцитонін людини